RNAscope®技術(shù)由美國(guó)Advanced Cell Diagnostics（ACD）公司于2012年推出，是RNA原位雜交（ISH）領(lǐng)域的革命性突破。該技術(shù)通過(guò)獨(dú)特的雙Z探針設(shè)計(jì)和級(jí)聯(lián)信號(hào)放大系統(tǒng)，實(shí)現(xiàn)了單細(xì)胞水平上單個(gè)RNA分子的可視化與精確定量，解決了傳統(tǒng)PCR和原位雜交技術(shù)無(wú)法兼顧“原位信息"與“高靈敏度"的痛點(diǎn)。  

 一、技術(shù)原理：雙Z探針如何攻克原位雜交的世紀(jì)難題？  

1. 探針設(shè)計(jì)：特異性與靈敏度的平衡藝術(shù)  

   每個(gè)目標(biāo)RNA對(duì)應(yīng)專屬的Z形探針，每對(duì)探針由兩條獨(dú)立序列構(gòu)成：  

     - 底部：18-25個(gè)堿基，精準(zhǔn)互補(bǔ)結(jié)合目標(biāo)RNA；  

     - 頂端：雙探針拼接成28個(gè)堿基的結(jié)合域，用于捕獲信號(hào)放大前體序列。  

    創(chuàng)新性要求兩探針必須緊鄰結(jié)合才能觸發(fā)信號(hào)，將非特異性結(jié)合導(dǎo)致的背景噪音降至近乎為零。  

2. 信號(hào)放大：分子“多米諾骨牌"效應(yīng)  

   信號(hào)生成通過(guò)四級(jí)級(jí)聯(lián)放大實(shí)現(xiàn)：  最終每個(gè)RNA分子在顯微鏡下呈現(xiàn)為一個(gè)清晰可辨的點(diǎn)狀信號(hào)，實(shí)現(xiàn)單分子定量。  

 二、性能優(yōu)勢(shì)：為何頂·級(jí)藥企與期刊紛紛青睞？  

超高靈敏度：僅需3對(duì)探針結(jié)合即可檢測(cè)單個(gè)RNA分子，即使目標(biāo)RNA部分降解（如FFPE樣本）仍可穩(wěn)定檢出；  

多重檢測(cè)能力：?jiǎn)螐埱衅贤綑z測(cè)3種RNA（熒光法）或2種RNA（顯色法），并可聯(lián)合蛋白共標(biāo)；  

全流程高效：手工操作僅需2.5小時(shí)，兼容石蠟切片、冰凍組織及細(xì)胞樣本；    

 三、應(yīng)用場(chǎng)景：從腫瘤微環(huán)境到基因治療  

1. 腫瘤免疫治療研究的“隱形顯微鏡"  

    解析PD-1/PD-L1等免疫檢查點(diǎn)在腫瘤細(xì)胞與T細(xì)胞間的空間分布；  

    追蹤細(xì)胞因子mRNA（如IL-2、IFN-γ）在腫瘤微環(huán)境中的分泌來(lái)源。  

2. 神經(jīng)科學(xué)：繪制腦中的RNA地圖  

    可視化神經(jīng)元內(nèi)低豐度非編碼RNA（如lncRNA）的亞定位；  

追蹤神經(jīng)活性標(biāo)志物（如c-fos）的動(dòng)態(tài)表達(dá)。

3. 病毒與宿主博弈的見證者  

    直接觀察HPV、HIV等病毒RNA在宿主細(xì)胞內(nèi)的復(fù)制位點(diǎn)，為抗病毒·藥物提供靶點(diǎn)證據(jù)。  

4. 藥物開發(fā)全周期護(hù)航  

    靶點(diǎn)驗(yàn)證：確認(rèn)候選藥物作用靶標(biāo)的組織分布；  

    臨床前安全評(píng)價(jià)：檢測(cè)藥物是否在非靶器官（如心臟、肝臟）誘發(fā)毒性RNA表達(dá)。  

 四、技術(shù)進(jìn)化：空間多組學(xué)時(shí)代的領(lǐng)·跑者  

2023年，ACD進(jìn)一步推出多靶標(biāo)原位共檢方案，已成為單細(xì)胞測(cè)序數(shù)據(jù)原位驗(yàn)證的核心工具，推動(dòng)“空間多組學(xué)"在腫瘤異質(zhì)性研究中的應(yīng)用。  

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