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ThruPLEX DNA-seq以pg級微量DNA作為起始樣本構(gòu)建文庫，特別設(shè)計接頭免去了中間純化步驟，簡化了文庫制備流程，整個實驗只需15分鐘手動操作且為1個反應(yīng)管、2個小時、3步反應(yīng)的簡單過程。尤其適合少量細(xì)胞起始的ChIP測序。

Rubicon ThruPLEX DNA-seq Kit

NGS新一代測序微量樣本DNA文庫制備試劑

英文名稱：ThruPLEX DNA-seq 96D Kit

中文名稱：DNA測序文庫制備試劑

貨號：R400407或RB4407（舊貨號）

品牌：Rubicon Genomics

加樣量 50 pg - 50 ng

反應(yīng)時間 2小時

手動操作 15 min

操作步驟 3步

類型 完整試劑盒，包含illumina測序索引（indexes）

適合樣本 所有打斷的雙鏈DNA

ThruPLEX DNA測序文庫制備試劑基于ThruPLEX化學(xué)技術(shù)制備DNA文庫，文庫的多重測序能力提高，具有更高多樣性。試劑zui高包含96個illumina兼容索引（indexes）。ThruPLEX DNA測序文庫制備試劑可用于DNA/RNA 測序和ChIP測序，并與主流目標(biāo)區(qū)域富集平臺兼容。

ThruPLEX DNA-seq應(yīng)用

全基因組測序（WGS）

全外顯子組測序（WES）

靶向測序

染色質(zhì)免疫共沉淀測序（ChIP-seq）

RNA-seq

應(yīng)用特別介紹：ChIP-seq

ChIP-seq引用文獻(xiàn)：2016至今有11篇ThruPLEX用于ChIP-seq 的高影響因子文章發(fā)表。

簡單的工作流程：3個反應(yīng)步驟在一個管內(nèi)進(jìn)行，只需2h，手動操作15min

模板修復(fù)—末端連接—擴增

組份：

分模板準(zhǔn)備、文庫合成和文庫擴增三大部分。保存-20℃。

模板準(zhǔn)備緩沖液+模板準(zhǔn)備酶（紅色）

文庫合成緩沖液+文庫合成酶（黃色）

文庫擴增緩沖液+文庫擴增酶（綠色）

Illumina索引（indexing） 試劑（藍(lán)色）

無核酸酶水（無色）

ThruPLEX DNA-seq特點

高靈敏度、高性能：以低至50 pg至50 ngDNA為起始材料，尤其適合ChIP-DNA

快速簡便的工作流程：單管或單孔3步操作，2小時，無需轉(zhuǎn)移操作

可重復(fù)的結(jié)果：構(gòu)建文庫具有高多樣性、低重復(fù)度和GC偏差

完整的文庫構(gòu)建試劑：優(yōu)化的illumina index引物和接頭試劑、酶、緩沖液及無核酸酶水

兼容主流目標(biāo)區(qū)域富集平臺：Agilent SureSelect®, Roche Nimblegen® SeqCap® EZ及 IDT xGen® Lockdown® probes

ThruPLEX技術(shù)—莖環(huán)形 接頭

莖環(huán)形接頭的特別設(shè)計，能夠有效抑制二聚體的形成，免去了大多數(shù)Illumina等文庫制備技術(shù)需要的中間純化和樣品轉(zhuǎn)移步驟。整個實驗只需15分鐘手動操作且為1個反應(yīng)管、2個小時、3步反應(yīng)的簡單過程。僅在PCR反應(yīng)后進(jìn)行1次磁珠純化，純化造成的樣品損失低，可對珍貴樣品進(jìn)行有效分析。

莖環(huán)形接頭的設(shè)計降低實驗背景，免去了中間純化步驟。

ThruPLEX DNA-seq 制備文庫高多樣性 低重復(fù)度 低GC偏差

ThruPLEX DNA-seq Kit 優(yōu)于其他NGS文庫制備試劑。與其他試劑相比，ThruPLEX DNA-seq Kit可以更少的起始DNA，構(gòu)建多樣性更好（左圖），重復(fù)更少（右圖）的文庫（25 M read pairs）。NGS文庫分別采用圖示對照gDNA起始量，以相應(yīng)的文庫制備試劑制備，采用MiSeq v3 flow cell測序。

ThruPLEX DNA-seq Kit 減少了GC偏差。以人類基因組相對覆蓋度為GC含量（%）的函數(shù)（50 ng DNA起始）。（左圖）ThruPLEX DNA-seq Kit 在整個范圍內(nèi)都有出色的覆蓋。（右圖）ThruPLEX DNA-seq Kit （金色）與參試的其他試劑一樣好或更好。請注意，在這些圖中的覆蓋度應(yīng)該為1。人類基因組中的GC含量分布以紅色柱形圖表示。

自備試劑：

Agencourt®XP 核酸純化磁珠（Beckman Coulter，目錄號A63880）

引用文獻(xiàn)：

2017年以來，谷歌學(xué)術(shù)上搜索Rubicon ThruPLEX DNA-seq 有94篇文獻(xiàn)。

背景介紹

新一代測序（英文名稱Next Generation Sequencing，縮寫NGS）是一個需求快速發(fā)展的動態(tài)領(lǐng)域。無論樣品類型或應(yīng)用如何，每個樣品都需要制備DNA文庫，以便在Illumina NGS平臺上進(jìn)行測序。

文庫制備過程（下圖）涉及將Illumina測序接頭與片段DNA連接并添加Illumina兼容索引（indexes）以允許多個樣本的流動池混合測序（多重平行測序）。文庫制備是NGS操作流程的關(guān)鍵步驟，并直接影響測序結(jié)果的質(zhì)量。

隨著NGS臨床應(yīng)用的出現(xiàn)以及隨著NGS測序儀器功能的日益強大，研究人員和臨床醫(yī)師正在越來越多地調(diào)查更加困難和具有挑戰(zhàn)性的樣品，這些樣品數(shù)量有限，使用量少，有的還受損。在許多應(yīng)用中，例如來自血漿的游離DNA，樣品DNA材料有限且高度降解。

在DNA樣本比較珍貴時，例如腫瘤組織的分析，使用少量樣本的能力可以盡可能多的保存樣本用于多種用途。臨床樣品還需要仔細(xì)追蹤樣品，樣品從不離開試管的方案有利于確保準(zhǔn)確的樣品追蹤并避免污染。這種不斷增長的趨勢需要文庫制備試劑盒，它能夠以簡單的工作流程精確地保留樣本的復(fù)雜性并提供更高的靈敏度和更高的多重測序能力。

滿足這些需求是ThruPLEX DNA測序試劑的核心。它的開發(fā)旨在提高多重測序能力，并從少量樣本制備高品質(zhì)、兼容Illumina的NGS文庫。ThruPLEX DNA-seq的三步式單管文庫制備是業(yè)界zui簡單的操作流程，可zui大限度地減少處理錯誤和寶貴樣品的損失。

名詞解釋：ChIP-seq 結(jié)合DNA測序分析蛋白與DNA的相互作用，確定DNA相關(guān)蛋白的結(jié)合位點。

ChIP：染色質(zhì)免疫共沉淀技術(shù)（Chromatin Immunoprecipitation，ChIP）也稱結(jié)合位點分析法。

ChIP測序也稱為ChIP-seq，是一種用于分析蛋白質(zhì)與DNA相互作用的方法。 ChIP-seq將染色質(zhì)免疫沉淀（ChIP）與大規(guī)模平行DNA測序相結(jié)合，以確定DNA相關(guān)蛋白的結(jié)合位點。它可以用來精確地定位任何目標(biāo)蛋白質(zhì)的結(jié)合位點。

ThruPLEX DNA-seq訂購信息

R400407/RB4407為期貨

Rubicon公司成立于2000年，總部位于美國密歇根州。產(chǎn)品都擁有技術(shù)，檢控嚴(yán)格，擁有cGMP級生產(chǎn)能力，是單細(xì)胞測序文庫構(gòu)建的。2017年1月，Rubicon 成為Takara的一員，并且發(fā)展良好。

華雅再生醫(yī)學(xué)旗艦公司：紅榮微再（上海）生物工程技術(shù)有限公司主營細(xì)胞治療和精準(zhǔn)醫(yī)療等產(chǎn)品，2018年與TAKARA繼續(xù)合作，授權(quán)代理（上海）其旗下Rubicon單細(xì)胞文庫構(gòu)建試劑等產(chǎn)品。

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