產品名稱：illumina MiniSeq中通量病毒基因測序試劑盒

產品貨號：FC-420-1004

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產品名稱：Miniseq Mid Output Kit（300-cycles）基因測序試劑盒

產品貨號：FC-420-1004

產品規(guī)格：

大輸出                  2.4 Gb（MiniSeq Mid Output Kit (300-cycles)）

每次運行的大讀數        高達800萬

試劑類型                  簇生成，配對末端測序，合成測序

核酸類型                  DNA，RNA

系統(tǒng)兼容性                MiniSeq

技術                       測序

MiniSeq試劑盒   讀數    套件尺寸（循環(huán)）  通量 (大)   2 × 150 通量   2 × 75 通量    1 × 75 通量      

MiniSeq中通量試劑盒     8 M      300              2.4 Gb         2.4 Gb             1.2 Gb           600 Mb  

Gb =千兆堿基，M =百萬

產品介紹：

MiSeq測序試劑盒v2實現更高通量，減少MiSeq運行次數。MiSeq試劑盒v2保留了與v1試劑盒相同的即用型預裝試劑盒，但改良了化學過程，提高簇密度，減少循環(huán)時間，并提高質量(Q)分值。目前還提供Micro和Nano規(guī)格的MiSeq試劑盒v2，適合低通量的應用。

改良化學過程后，循環(huán)時間更快、片段更長、輸出更多

雙表面成像實現的片段數是v1試劑盒單表面成像的兩倍

使用500次循環(huán)的試劑盒可擴展片段長度

選擇您應用的循環(huán)次數(50、300或500)

與升級的MiSeq系統(tǒng)結合使用，MiSeq試劑盒v2的雙表面成像可使每個流動槽的通量翻倍。MiSeq試劑盒v2提供可生成較長片段長度的500次循環(huán)格式，以及廣受歡迎的50次循環(huán)和300次循環(huán)格式。

MiSeq測序試劑盒v3的通量在所有MiSeq試劑盒中居*。這款v3試劑盒保留了與v1和v2試劑盒相同的即用型預裝試劑盒，通過改良試劑，可提高簇密度和片段長度，并提高質量(Q)分值。借助MiSeq試劑盒v3，研究人員可:

使單次運行的輸出翻倍

使用600次循環(huán)試劑盒，使片段長度zui長延伸至2 x 300堿基對

將片段數量增至2500萬個，以開創(chuàng)新的應用

所有MiSeq試劑組件都采用RFID編碼，并可巧妙地與MiSeq系統(tǒng)交互，以驗證與用戶定義的應用之間的兼容性。

產品名稱：illumina 中通量 病毒基因測序試劑盒        產品貨號：FC-420-1004

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Illumina二代測序技術，邊合成邊測序（SBS），是廣泛采用的新一代測序（NGS）技術，負責產生世界上90％以上的測序數據。

Illumina的二代測序技術稱為邊合成邊測序(Sequencing-by-Synthesis,簡稱SBS)。SBS主要包括堿基延伸、熒光激發(fā)及信號收集、剪切等3個步驟。這3個步驟可以重復，循環(huán)進行。每循環(huán)一次測定一個堿基。想測定多少個堿基（即讀長），就循環(huán)多少次。測序循環(huán)次數可以在軟件里設定。到底測序多長合適，要根據項目性質和需求來決定。大多數情況下，SR實驗（單端測序）測定1x50個堿基，PE實驗（雙端測序）測定2x150個堿基。

1 堿基延伸

Illumina測序試劑里所使用的dNTP級具特色，它們同時具有兩個修飾基團：一個熒光基團，一個可逆終止基團。A、G、C、T 4種堿基分別標記4種不同的熒光基團，它們在不同波長的激光激發(fā)下，能夠發(fā)射不同波長（即顏色）的熒光。熒光顏色與堿基種類一一對應，因此根據激發(fā)光的波長可以識別堿基。4種堿基的終止基團是一樣的。由于終止基團的存在，所有dNTP每次都只能延伸1個堿基，無論給予多長的反應時間。又由于該終止基團是可逆的，在熒光信號收集完畢之后，可以用剪切劑切除該終止基團，使堿基恢復自然的可延伸狀態(tài)，這時即可繼續(xù)進行下一輪循環(huán)，再測定一個堿基。

可逆終止基團技術是Illumina二代測序的一大特色。它與橋式PCR技術一起，構成了Illumina二代測序的兩大支柱，為穩(wěn)定獲得高質量的測序數據打下了堅實的基礎。

2 信號采集

HiSeq系列測序儀具有紅綠兩根激光管，兩個濾色片。它們兩兩組合，可以形成4種不同的激發(fā)波長，正好分別用于激發(fā)A、G、C、T 4種堿基。

Cluster上所標記的熒光基團在激光激發(fā)下產生的信號，可以用相機拍攝或者掃描的方式收集信號。掃描技術速度比較快，被X10系列采用。由于FC面積比較大，而且上表面和下表面要分別拍照，所以拍照過程相當耗時。對于經典的HiSeq 2000來說，一次測序循環(huán)所產生的熒光信號，需要大約40分鐘的時間才能拍照收集完畢，時間比測序反應本身還要長。

3 剪切

熒光信號收集完畢后，關閉激光，用剪切劑去除測序引物的延伸產物上的堿基所標記的熒光基團和終止基團。兩個修飾基團均被切除，一方面消去干擾熒光，一方面使鏈末端的堿基回復到自然的可延伸狀態(tài)，為下一輪測序做好準備。

再重復合成、激發(fā)、收集等步驟，即可進行第二個堿基的測序。

測序循環(huán)可以重復多次。理論上可以一直重復，直到信噪比降低得無法有效識別堿基信號為止。由于熒光基團的發(fā)光效率持續(xù)不斷在衰減，Taq酶的活性也在持續(xù)不斷地衰減，所以實際上測序循環(huán)次數是有限的，大重復次數與sbs試劑的配方有關。測序的循環(huán)次數可以在軟件設置過程中人為，這個重復次數就是每個測序片段的讀長。目前，Illumina平臺的讀長有2x100 bp，2x125 bp，2x150 bp，2x300 bp等多種，其中2x150 bp用得zui廣泛。

單端測序：單端測序(Single-read)首先將DNA樣本進行片段化處理形成200-500bp的片段，引物序列連接到DNA片段的一端，然后末端加上接頭，將片段固定在flow cell上生成DNA簇，上機測序單端讀取序列。

雙端測序：雙端測序(Paired-end)方法是指在構建待測DNA文庫時在兩端的接頭上都加上測序引物結合位點，在一輪測序完成后，去除一輪測序的模板鏈，用對讀測序模塊(Paired-End Module)引導互補鏈在原位置再生和擴增，以達到第二輪測序所用的模板量，進行第二輪互補鏈的合成測序。

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